Estandarización de protocolos de transformación genética en Escherichia coli y Agrobacterium tumefaciens para la generación de una colección de constructos génicos
1 recurso en línea (páginas 9-16).
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Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia
2019
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| author | Gómez Arias, Linda Yhiset Gómez Daza, Silvia Núñez Zarantes, Víctor |
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| institution | Repositorio Institucional UPTC |
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| publishDate | 2019 |
| publisher | Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia |
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| spelling | repositorio.uptc.edu.co-001-23742021-02-10T19:03:33Z Estandarización de protocolos de transformación genética en Escherichia coli y Agrobacterium tumefaciens para la generación de una colección de constructos génicos Standardization of genetic transformation protocols in Escherichia coli and Agrobacterium tumefaciens for the generation of a collection of gene constructs Gómez Arias, Linda Yhiset Gómez Daza, Silvia Núñez Zarantes, Víctor Ingeniería genética vegetal Genética vegetal Plantas - Expresión del gen Transformación genética vegetal Vectores genéticos Gen reportero Electroporación Constructo génico Transformación genética 1 recurso en línea (páginas 9-16). An important tool in plant genetic engineering is the vectors or genic constructs that contain reporter genes, utilized to facilitate the standardization of genetic transformation protocols. The objective of this study was evaluate genetic transformation protocols for generate in a quick and confinable manner, a base collection of genic constructs in Escherichia coli strain DH5α and Agrobacterium tumefaciens strains LBA 4404, EHA 105 y C58, using 25 binary vectors (pSK1019, pMP2482 y 23 de la serie pCAMBIA) that contain the reporter genes gfp and gus, by using the heat shock and electroporation techniques. The transformants confirmation was made by PCR amplification and by restriction enzymes assay with Eco RI and Xho I. These approaches allowed verifying the presence Successful of the 25 vectors inside the used bacteria. The results indicate that it is necessary to standardize the transformation protocols in the bacterial strains to be used because they do not all transform with the same conditions and this work can be a reference for the standardization in other laboratories of genetic transformation when working in a massive way. Una herramienta necesaria en la ingeniería genética de plantas son los vectores o constructos génicos que contienen genes reporteros, pues facilitan la estandarización de procedimientos de transformación genética. El objetivo de este estudio fue evaluar protocolos de transformación genética para generar un procedimiento que permitiera de manera rápida y confiable obtener una colección base de constructos génicos en Escherichia coli cepa DH5α y Agrobacterium tumefaciens cepas LBA 4404, EHA 105 y C58, empleando 25 vectores binarios (pSK1019, pMP2482 y 23 de la serie pCAMBIA) que contienen los genes reporteros gfp y gus utilizando las técnicas de choque térmico y electroporación. La confirmación de los transformantes se realizó mediante PCR y cortes con enzimas de restricción (Eco RI y Xho I), lo que permitió verificar la presencia exitosa de estos 25 vectores dentro de las bacterias empleadas. Los resultados indican que es necesario estandarizar los protocolos de transformación en las cepas bacterianas a util izar porque no todas transforman con las mismas condiciones y este trabajo puede ser un referente para la estandarización en otros laboratorios de transformación genética cuando se trabaja de manera masiva. Bibliografía y webgrafía: páginas 15-16. 2019-02-04T20:38:30Z 2019-02-04T20:38:30Z 2018-07-04 Artículo de revista http://purl.org/coar/resource_type/c_6501 info:eu-repo/semantics/article info:eu-repo/semantics/publishedVersion Text https://purl.org/redcol/resource_type/ART http://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85 Gómez Arias, L. Y., Gómez Daza, S. & Núñez Zarantes, V. (2018). Estandarización de protocolos de transformación genética en Escherichia coli y Agrobacterium tumefaciens para la generación de una colección de constructos génicos. Ciencia en Desarrollo, 9(2), 9-16. DOI: https://doi.org/10.19053/01217488.v9.n2.2018.3861. http://repositorio.uptc.edu.co/handle/001/2374 2462-7658 http://repositorio.uptc.edu.co/handle/001/2374 10.19053/01217488.v9.n2.2018.3861 spa N. Castañeda, J. Chaparro y J. Castellanos, “Tecnología de la clonación y expresión génica en un sistema bacteriano y su aplicación en virología”, Revista de la Facultad de Medicina, vol. 11, pp. 43-53, 2006. Sambrook J. and Russell D. Molécular cloning a laboratory manual. Edition 3a, New York, Cold spring harbor laboratory press. 1.35-1.37. 2001. D. Hanahan. “Studies on transformation of Escherichia coli with plasmids”, Journal of Molécular Biology, Vol. 166, no 4, pp. 557- 580, 1983 Madigan M, Martinko J, and Parker J, Brock Biología de los Microorganismos, Octava edición, Madrid, Prentice Hall Iberia. 1999 S. Domingues, K. Harms, WF. Fricke, P. Johnsen, Pål, G. da Silva, and K. 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López “Transformación genética mediada por Agrobacterium tumefaciensy recuperación de plantas trasgénicas de papa (Solanum tuberosum sp. andigena var Pastusa premia)” trabajo de fin de Master. Univ. Nacional de Colombia, 2006. Ciencia en Desarrollo;Volumen 9, número 2 (Julio-Diciembre 2018) Copyright (c) 2018 Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/ info:eu-repo/semantics/openAccess Atribución-NoComercial 4.0 Internacional (CC BY-NC 4.0) http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 application/pdf application/pdf Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia https://revistas.uptc.edu.co/index.php/ciencia_en_desarrollo/article/view/3861/7244 |
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